廣州博濟醫藥生物技術股份有限公司
股票代碼為(300404)創建于2002年,2015年在深圳創業板上市,是一家為國內外醫藥企業提供藥品、保健品、醫療器械研發與生產全流程“一站式”外包服務(CRO)的型高新技術企業,同也提供藥品上市許可持有人(MAH)服務。
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藥品研發“一站式”服務包括:新藥立項研究和活性篩選、藥學研究(含中試生產)、藥理毒理研究、臨床用藥與模擬劑的生產、臨床試驗、臨床數據管理和統計分析、上市后再評價、技
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博濟醫藥始終堅持“誠實、守信、專業、權威”的經營理念,截至2018年6月末,公司累計為客戶提供臨床研究服務500余項,基本涵蓋了藥物治療的各個專業領域;累計完成臨床前研究服務300多項。經過十五年的發展,博濟醫藥在技術實力、服務質量、服務范圍、營業收入、團隊建設等方面都已躋身我國CRO公司的領先位置,成為我國本土大型CRO公司的龍頭企業。
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  • 袁來如此 | 大分子生物分析概論(十四_下):LBA定量分析雙特異性生物藥的挑戰
    2021/08/30
    ?此前,&ldquo;袁來如此&rdquo;專欄根據已發表的文獻資料,對PK定量方法的設計作初步介紹(袁來如此 | 大分子生物分析概論(十四_上):LBA定量分析雙特異性生物藥的挑戰)。本期將延續上期內容,重點就相關案例分析、復雜藥物分子的未來生物分析技術以及前景等方面進行探討。 &ldquo;袁來如此&rdquo;專欄系廣州博濟醫藥微信公眾號打造的科普學術專欄,內容均為博濟醫藥藥物研究中心資深科學顧問袁智博士原創。 案例分析(Case studies) 以下案例研究是為了說明對于雙特異性分子而言,生物分析的獨特考慮,其適用于在藥物開發的不同階段設計和實施定量生物分析和PK評估。案例分析1:在非臨床研究中定量總和完整雙特異性藥物并評估ADA對PK的影響。 化合物X是一種基于支架的針對兩種細胞因子的雙特異性抗體。初步數據表明,這種特殊的支架產品平臺可以在非臨床物種中高頻率地誘導免疫原性。為了更好地解釋ADAs存在時的毒理學發現,生物分析小組決定開發兩種不同的PK方法來測定動物血清中的總藥物和完整藥物的濃度??侾K方法是使用兩種抗體對支架的框架進行分析。完整的PK方法是使用一種靶向細胞因子作為捕獲試劑,另一種作為檢測試劑??梢杂^察到,使用兩種PK方法分析相同的樣品產生的濃度與時間關系幾乎完全等同,除了在較晚的時間點之外,藥物濃度非常低的時候,即完整藥物濃度略低于總藥物濃度的時候。 在這些時間點觀察到的低濃度差異只發生在少數受試者上。因此,ADA和生物轉化(biotransformation)被認為是最可能的根本原因。需進行一項研究以確定這種差異的根本原因,如生物轉化誘導的不穩定性,靶標干擾(target interference)和ADA干擾。為了驗證這種雙特異性分子的體內生物轉化,例如,蛋白質水解是否揭示了影響穩定性的結構缺陷,故開發了兩種配體結合質譜(ligand-binding mass spectrometry,LBMS)方法,使用抗人Fc免疫親和捕獲和靶目標捕獲,然后進行分層次的質譜分析。采用與ESI-MS相結合的納米級液相色譜法對非多種代謝產物進行了更高分辨率的分離和鑒定。 數據顯示,生物轉化的結果為陰性。ADA分析表明雙特異性分子比其母體藥物的ADA出現頻率更高。盡管隨后通過免疫原性表征,證實大多數ADAs并非中和性ADAs,但發現ADAs有助于快速地清除完整藥物。這些數據也可以解釋為當藥物濃度足夠低時,內源性細胞因子占據了特定的捕獲/檢測位點,即存在靶標干擾。結果表明,該藥物在體內結構穩定。PK數據差異與完整藥物的不穩定性無關,而更可能是由于ADAs高水平導致清除藥物的速度更快。案例分析2:一個F(ab&rsquo;)2在體內生物轉化為兩個活性F(ab)單體的PK分析。 本案例研究涉及一個雙特異性F(ab&rsquo;)2,由一個anti-VEGF arm和一個anti-Ang2 arm組成,用于玻璃體內注射(intravitreal administration)治療視網膜變性疾病,如濕性老年性黃斑變性和糖尿病性黃斑水腫。據報道,針對F(ab&rsquo;)2抗體鉸鏈區的,先前存在的內源性抗體(PEA)存在于很大比例的人群中。在未接受藥物的食蟹猴和人血清樣本中,都證實了這一點。移除這些預先存在的內源性抗體的鉸鏈表位(hinge epitopes)使得該分子中只有單個二硫鍵將兩個fab結合在一起。 因此,注射入玻璃體(其含有glutathione作為抗氧化產品的一部分,以保證晶狀體的完整性)后,藥物分子生物轉化為individual Fabs,相關清除率(t1/2 <1天),通常比兔玻璃體的Fab (t1/2 約3天)或F(ab&rsquo;)2 (t1/2 約3天)的清除率要大(未發表的觀察結果)。 備注:一般情況下,t1/2與清除率的關系如下,即半衰期還取決于藥物分布體積;如果假設分布體積恒定,則t1/2與清除率之間的關系是確定成反比的: 因此,完整的F(ab&rsquo;)2和individual Fab碎片均存在于眼腔(玻璃體和水相之中)和系統循環之中。正如所預料的,嚙齒類動物脈絡膜新生血管模型(rodent choroidal neovascularization models)顯示,individual Fabs保留了生物活性。為了全面地描述活性藥物暴露量的特征,有必要定量這3種藥物形式。因此,開發并驗證了3種單獨的PK定量方法。此前有學者曾經考慮過使用一種總PK定量方法來測定所有這3種形式。但是,該分子是一個新穎結構,故有必要闡明其生物轉化的動力學,這對于描述該分子體內的行為是很重要的。 定量完整待測物的ELISA方法使用固定的(immobilized)重組蛋白Ang2捕獲待測物,然后加入biotin-VEGF,最后加入streptavidin-HRP,是一個sequential sandwich格式。外加待測物的回收率實驗證明這種測試格式僅能夠特異性地檢測F(ab&rsquo;)2,但檢測不到兩種Fab分子中的任何一個。定量兩個Fab分子的方法都采納類似的基本格式:使用各自的靶標-Ang2或靶標-VEGF,從樣本中捕獲Fabs。然后加入biotin-sheep antihuman IgG的重鏈和輕鏈(H&L),最后,加入streptavidin-HRP進行檢測。 值得注意的是,采用測定Fab的格式,也可以檢測到完整分子。盡管使用Fabs作為標準品(standards)和對照品(controls),在分析Fab時,也定量了完整F(ab&rsquo;)2。此外,使用F(ab&rsquo;)2和任何一個Fab的混合物,可以通過從完整分子(高特異性)的定量結果中減去Fab結果來定量另一個Fab。已經驗證了所有這些分析方法,并用于兔血清樣本的非臨床研究,也認證了這些方法可用于食蟹猴的血清和水/玻璃體/視網膜的萃取物中藥物的定量。血清定量分析的另一個挑戰是幾個ng/ml甚至更低的藥物濃度,這也是玻璃體腔生物藥給藥的一致特點:給藥量很小(通常是<1 mg/eye);藥物在到達系統循環時,經歷了高倍數的稀釋。案例分析3:在非臨床研究中監測體內雙特異性藥物生物轉化的總和活性(total and active)藥物的定量。 一個針對腫瘤適應癥的雙特異性單克隆抗體靶向兩個細胞表面的抗原,其藥理作用取決于單克隆抗體的兩個結合臂(both binding arms)的完整。然而,在體外生物物理表征過程中,在其中一個結合臂中發現了翻譯后修飾(post-translational modification,PTM)的問題。但這種PTM,不能在不顯著損害生物活性的情況下,通過蛋白質工程而排除,因為在不穩定的氨基酸上的點突變(point mutation)會完全破壞單抗與靶標的結合。此外,僅具有第二個結合臂功能的藥物變異體的累積,可能會屏蔽活性藥物結合第二個靶點,并可能在多次給藥后誘發毒性反應。 對該單抗體內生物轉化的特征進行研究是勢在必行的,如轉化的動力學和程度,這可以為進一步開發該單抗提供指導。隨后,使用與分子的Fc部分特異性結合的測試試劑開發了一個橋接格式的總藥物PK定量方法,輔之以一種活性藥物PK定量方法:即使用靶標蛋白作為PTM-liable functional domain的捕獲試劑,使用抗人Fc試劑作為檢測試劑。利用野生型和擁有點突變的藥物的混合比例,活性PK方法,在總藥物存在的情況下,能夠區分和準確測定活性藥物的百分比。之后,評估了該藥物分子在食蟹猴上的PK特性。使用了總和活性PK定量方法來測定研究樣本中總和活性藥物的濃度。實驗數據證實,體內樣品中的藥物出現了PTM,并且活性藥物濃度百分比隨時間而降低?;诮:头抡?,可以在臨床研究中減少劑量間隔來減輕活性藥物濃度的降低。非臨床研究結果有助于決定使用活性PK定量方法作為支持臨床研究的主要方法。而在FIH研究中,總PK定量方法可用于進一步描述無活性藥物變異體(inactive drug variants)潛在的累積及其對PK/PD和毒性的影響。復雜藥物分子的未來生物分析技術 如表1中所總結的,一般需要多種PK定量方法和ADA方法評估ADC和雙特異性抗體的基礎藥代動力學和免疫原性。分析方法數量的增加給樣本的收集、儲存、運輸、分析和分析方法的生命周期管理帶來了巨大的負擔。在某些情況下,由于樣本數量有限,根本不可能進行多次分析。對于增加的功能域和潛在的生物轉化,僅僅增加分析方法的數量以滿足生物分析需求似乎是一個直接的解決方案,但&ldquo;兩點式two-point&rdquo;結合方法(如夾心式LBA)并不適合評估具有多域(>3)構造的分子&ldquo;完整性intactness&rdquo;。盡管免疫捕獲(IC-)-LC-MS/MS方法在理論上可以識別來自多個功能域的特征肽,但有關&ldquo;完整性&rdquo;和功能的信息仍然缺失。因此,隨著復雜藥物模式(complex drug modalities)的生物轉化越來越受到的關注,定量LBA方法和(IC-)LC-MS/MS方法往往無法對潛在的生物轉化提供相關信息。正如CovX-Body和基于框架(scaffold-based)的雙特異性抗體的案例所表明的那樣,PK行為的意外不一致觸發了潛在生物轉化的嫌疑,進而就需要新的分析方法來進一步研究。表1.ADC和雙特異性抗體的PK定量方法(SCR,標準曲線范圍;ECL,電化學發光;N.A.,不適用)備注:表格中參考文獻的標注不適用。 因此,使用multiplexed PK/ADA方法以測定完整藥物、各種變構體(variants)和相關的ADA是非常需要的,同時,也對潛在的生物轉化提供相關信息。Multiplexed檢測方法已在聯合療法中有早期應用,但尚未看到對復雜藥物模式&ldquo;biotransformation ready&rdquo;的multiplexed測試方法,用以幫助評估復雜藥物的完整性,表征各種生物轉化,并測試對藥物/藥物變構體各部分的免疫反應。下文將簡單介紹對復雜藥物模式有希望的兩項生物分析技術:HR-MS定量分析完整蛋白質和毛細管Western Blot定量分析。HR-MS 定量分析完整蛋白質 與針對完整藥物分子中某個選定區域的LBA和LC-MS/MS技術相比,完整蛋白質的定量分析旨在將一個復雜的藥物分子作為一個整體來研究,這能夠揭示重要的高層次結構和生物轉化的相關信息。完整蛋白的LC-MS分析通常用作對生物轉化研究的定性分析。Murphy等人使用IC-LC Q-ToF MS,在CovX-Body雙特異性抗體上發現并鑒別了蛋白酶剪切掉的含有8個氨基酸的肽段。He等人利用高分辨率的QTOF-MS與IC-LC相結合,成功地在小鼠血漿中,鑒別了若干不同DARs的ADC和生物轉化了的變異體(biotransformed variants,由于增加/刪除了hexose, glutathione, cysteine以及linker-drug)。近年來,HR-MS在靈敏度和質量分辨率方面的提高,逐漸使其在定量生物分析中得以有更廣泛的應用。 Jian等人建立了IC-LC-QTOF-MS的工作流程,用于小鼠血漿中人類mAbs的絕對定量。定量的下限(LLOQ)為1000ng/mL(20 ?L血漿樣品),并可降至250ng/mL,如果使用200?L樣品。在優化其數據處理策略后,LLOQ降至50ng/mL。使用所述工作流程,Jian等人隨后展示了GLP1-Fc融合蛋白的定量;同時,在對小鼠的研究過程中,識別了該藥物的兩種主要蛋白酶降解產物。 Lanshoeft等人驗證了基于multiplex IC-LC-HRMS的PK定量方法,并用于非臨床PK研究,該方法同時定量分析了大鼠血清中兩個人類IgG1。類似地,Jin等人在大鼠血清中定量了完整的trastuzumab emtansine(一種ADC)及其主要的DAR物種,其定量下限值約為20ng/mL,線性動態范圍為5-100?g/mL。 另一個有趣的應用是最近Zhang等人報道的,在非變性LC條件下對native intact mAb進行的定量分析,這可能為使用LC-HR-MS技術以multiplex的方式建立結合(bound)/未結合(unbound)PK定量方法以及其它各種功能域PK的定量方法提供了機會。毛細管Western Blot定量分析方法 毛細管Western blot,也稱為毛細管納米免疫測定(capillary nanoimmunoassay,CNIA),已由制造商Protein Simple(San Jose, CA)商業化的Simple Western system,是指毛細管電泳免疫測定系統,它提供基于蛋白質大小和電荷的分離格式。與在分離和檢測之前進行配體結合的IC-LC-MS技術不同,Western blot首先分離蛋白質,然后使用配體結合作為檢測方法。因此,它能夠使用multiplexed immunoassay,同時檢測完整的蛋白質及其生物轉化的產物,并對變異的各種功能域進行表征。 目前,毛細管Western Blot定量分析在蛋白質藥物的PK研究中應用仍然有限。Li等人在小鼠研究中驗證了無濃縮的PK方法,以定量小鼠血漿中的polyhistidine N-和FLAG C-terminally-tagged重組蛋白(約55kDa),其LLOQ為20ng/mL。Anti-FLAG tag抗體在immunoblot步驟中用作初級抗體。研究發現,只需以1:100至1:500的比例稀釋樣品,即可消除基質中高豐度蛋白的干擾。 此外,Kodani等人使用capillary western blot檢測到丙型肝炎病毒(HCV)的IgG抗體,表明其在抗藥物抗體(ADA)檢測方面的潛在應用。重組HCV蛋白首先在毛細管中分離和固定。稀釋的人類血清隨后在毛細管中孵育,使抗HCV抗體與固定的抗原結合。這一步驟之后,使用抗人類IgG-HRP抗體再進行第二次孵育。在70個特表征良好的人血清樣本的檢測中,該方法與另一種市售的抗HCV抗體測試方法的相關性良好。結論 為了解決雙特異性分子開發過程中所需的生物分析支持,本文討論了在開發這些藥物分子的PK分析策略時一些獨特的考慮。本文提出的策略和方法可以應用于雙特異性分子和其它多域大分子藥物,這需要對特定的藥物分子其作用機制(MOA)和潛在的靶標生物學,以及評估PK/PD的所需要的數據有全面的了解。 大分子生物分析行業需要新的定量分析技術來開發multiplexed PK定量方法,以便定量復雜模式的藥物及其生物轉化產物。用于完整蛋白質分析的(IC-)LC-HR-MS和capillary Western blot技術擁有很大應用前景,因其multiplexibility和提供目標待測物的多維信息(如分子量等電點和域功能/domain functionality)的能力。在過去幾年中, HR-MS和capillary Western blot platforms的定量靈敏度有了顯著改善,盡管這些技術仍需要進一步改善,以獲得更廣泛的接受。當前HR-MS系統的一般操作相對簡單,但HR-MS(以及capillary Western blot)的數據分析、解釋和驗證,從監管的角度看,還需要進一步明確。 從理想的和雄心勃勃的角度思考,最好將PK/PD/免疫原性/生物轉化的生物分析整合到一個分析測試方法之中,以減少藥物開發所需的資源,并促進在同一組患者樣本中全面闡明藥物的PK/PD行為。設計和開發這樣的定量分析的方法,對每一種生物藥結構都是獨特的,需要一種徹底的&ldquo;適合其用途&rdquo;的方法及其確認(confirmation)。為雙(多)特異性分子開發可靠、穩健和可重現的PK分析方法是非常具有挑戰性的,因為多種因素會影響準確(accurate)而有意義(meaningful)的濃度測定值。未來生物分析行業和監管機構對指導定量分析這些高度復雜的生物(蛋白)藥的最佳做法的討論和意見,將會極具價值。未來前景 隨著生物分析方法的特異性、選擇性和靈敏度的不斷提高,更準確(accurate)和更精密(precise)的測定雙特異性抗體濃度和評估其在生物樣品中的免疫原性將成為可能。預計雙特異性和多特異性生物藥的數量和種類將繼續擴大,這將促進新的生物分析方法的開發,以適應這些分子的結構復雜性和MOAs。 當然,目前的方法將被用于新的蛋白藥物的定量。盡管LBA方法是目前生物分析方法的首要選擇,并且在可以預見的未來仍將如此,LC-MS/MS方法,由于其與生俱來的multiplexed的定量分析能力,可能會得到更加廣泛地應用,以支持雙特異性生物藥的PK評估。LC-MS/MS比LBA分析具有更少的分析變異性(variability)和關鍵試劑的可及性(availability)問題。預期分析實驗室的自動化將擴展到生物分析的所有階段,以減少人工錯誤和提高數據質量。特別聲明 本文如有疏漏和誤讀相關指南和數據的地方,請讀者評論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經發表學術期刊、官方網絡報道等公開渠道, 不涉及任何保密信息。參考文獻的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價值的文獻及其評估。 參 考 文 獻1.Zhu, L, et al. 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  • 最新消息!CDE剛剛發布了《創新藥臨床藥理學研究技術指導原則(征求意見稿)》
    2021/08/30
    今天(8月30日),CDE官網發布了《創新藥臨床藥理學研究技術指導原則(征求意見稿)》。該文件涵蓋了前言、創新藥臨床藥理學研究的目的和作用、臨床藥理學研究總體計劃、研究內容和研究時機、研究方法、研究設計的總體考慮、化學創新藥和生物制品創新藥的基本考慮、監管考慮等8大章節,征求意見時間為1個月。 近年來,創新藥的研發日益增多。臨床藥理學研究作為支持探索性和確證性臨床研究設計和上市申請的重要理論依據,是創新藥上市申請中的重要內容之一。為引導行業和研究者充分理解創新藥臨床藥理學研究內容,進一步指導創新藥臨床藥理學研究的總體設計和評價,藥品審評中心組織起草了《創新藥臨床藥理學研究技術指導原則》。 我們誠摯地歡迎社會各界對征求意見稿提出寶貴意見和建議,并及時反饋給我們,以便后續完善。征求意見時限為自發布之日起1個月。 您的反饋意見請發到以下聯系人的郵箱: 聯系人:王玉珠;李 健 聯系方式:wangyzh@cde.org.cn;lijian@cde.org.cn 感謝您的參與和大力支持。 國家藥品監督管理局藥品審評中心 2021年8月30日 附件 1 :《創新藥臨床藥理學研究技術指導原則(征求意見稿)》.pdf 附件 2 :《創新藥臨床藥理學研究技術指導原則(征求意見稿)》起草說明.pdf關于博濟醫藥 臨床研究服務:博濟醫藥擁有一支規模龐大、專業成熟的臨床研究隊伍,可提供包括醫學、項目管理、監查、稽查、數據管理和統計分析、生物樣本檢測在內的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年,博濟醫藥服務的客戶超1000家,完成800多項臨床試驗項目,助力客戶獲得新藥證書60多項、生產批件超過80項。在有豐富的臨床試驗服務經驗,服務項目涵蓋臨床研究各個領域,在腫瘤、肝病、消化等創新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。 博濟醫藥在全國設有40多個臨床監查網點,與全國近600個臨床試驗機構展開合作,并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統,控制臨床數據采集的及時性、管理臨床試驗過程的規范性。
  • 喜訊!博濟醫藥助力1類創新藥完成I期臨床研究并獲得積極結果
    2021/07/30
    今天(7月30日),由博濟醫藥提供全程CRO服務的重組人紅細胞生成素(Fc)融合蛋白注射液I期臨床研究(簡稱&ldquo;rhEPO-Fc項目&rdquo;)順利完成,標志著rhEPO-Fc項目整體工作穩步快速推進。 rhEPO-Fc項目是由大灣生物控股有限公司(簡稱大灣生物)旗下子公司廣州太力生物醫藥科技有限公司自主研發的創新型1類治療用生物制品,其I期臨床研究在廣東省人民醫院開展,由博濟醫藥提供全程CRO服務。 rhEPO-Fc項目I期臨床試驗結果積極。根據所得研究數據,后續臨床試驗可根據現有結果開發延長給藥間隔之后的安全性和療效,與目前國內2-3次/周使用的EPO相比,本品后續給藥方案有望調整至2周一次或更長的間隔時間。在安全性方面,本項目研究過程中未發生與藥物有關的嚴重不良事件及免疫原性問題。研究者及相關專家一致認為,本品安全性、耐受性良好、半衰期顯著延長,可以順利進行后續的臨床研究。 大灣生物CEO及聯合創始人陳亮博士表示:&ldquo;我們很高興能夠看到rhEPO-Fc項目取得階段性的進展,這也是長效EPO藥物面世的重要步驟,本次合作深刻感受到了廣東省人民醫院和博濟醫藥的專業性和執行力。長效EPO臨床項目順利開展,將為中國腎病患者帶來福祉!&rdquo; 博濟醫藥相關負責人表示,rhEPO-Fc項目I期臨床研究的順利完成是大灣生物、廣東省人民醫院、博濟醫藥等多方共同努力的卓越成果。在后續研究中,博濟醫藥將與各方繼續保持積極配合和緊密對接,助力rhEPO-Fc項目取得更大進展,造福人類生命健康。關于大灣生物: 大灣生物總部位于香港,是一家致力于將人工智能前沿技術應用于藥物開發平臺的高新技術企業,解決了藥物開發成功率低、周期長、成本高等諸多痛點。公司擁有3100平方米的研發實驗樓,成功將多個生物藥推入BLA階段,其中包括多個國家I類新藥。公司自成立以來,在開發多個國家新藥過程中,積累了大量實驗數據,創建了智能化集成數據庫,通過深度學習,將打造新一代人工智能化藥物研發生態系統。關于博濟醫藥 臨床研究服務: 博濟醫藥擁有一支規模龐大、專業成熟的臨床研究隊伍,可提供包括醫學、項目管理、監查、稽查、數據管理和統計分析、生物樣本檢測在內的臨床試驗全流程解決方案。截至2020年,博濟醫藥服務的客戶超1000家,完成800多項臨床試驗項目,助力客戶獲得新藥證書60多項、生產批件超過80項。在有豐富的臨床試驗服務經驗,服務項目涵蓋臨床研究各個領域,在腫瘤、肝病、消化等創新藥領域擁有獨特的臨床服務體系。 博濟醫藥在全國設有40多個臨床監查網點,與全國近600個臨床試驗機構展開合作,并運用ORACLE OC/RDC及CTMS系統,控制臨床數據采集的及時性、管理臨床試驗過程的規范性。
  • 袁來如此 | 大分子生物分析概論(十三_上)
    2021/07/29
    本期《袁來如此》為系列文章《大分子生物分析概論》的第十三篇,旨在根據已發表的文獻資料,對評估藥物臨床前PK/PD時,開發和選擇LBA方法的策略作初步介紹。 由于內容篇幅較長,本文將采取上下篇形式進行推送,敬請垂注!《袁來如此》專欄系廣州博濟醫藥微信公眾號打造的科普學術專欄,內容均為博濟醫藥子公司深圳博瑞副總經理袁智博士原創。1.導論 藥物發現是一個快速的transformative的過程,其包括靶標識別、靶標驗證、先導藥物的識別和優化。隨著項目推進經過這些階段,對生物分析的需求也在相應地改變。開發合適的生物分析方法可以提供藥代動力學和藥效動力學(PK/PD)的寶貴數據,以支持在新藥研發項目不同階段中關鍵的藥效和安全性研究,從而為項目的進展奠定堅實的基礎。在新藥早期的發現階段,會同時考慮不同藥物模式(drug modalities)的多個分子。一般有多種模式可供選擇,取決于靶標及其位置,例如,傳統的小分子、多肽、單克隆抗體、抗體-藥物偶聯物、納米抗體、融合蛋白藥物、雙特異性生物藥和寡核苷酸。在生物技術產業中,藥物的快速發現以及快速開發正推動著生物分析領域的發展和演進。這種演進的主要內容是,縮短分析運行時間,實施multiplex分析,提高靈敏度,降低樣品體積的消耗,實現分析測試的自動化。 本文關注的重點是臨床前蛋白藥物生物分析方法的開發策略,即LBA分析平臺的選擇和方法開發中的關鍵注意事項。本系列之前的文章,基本是關注用于臨床樣本分析的LBA方法。為了簡單起見,在此文中僅評估用于檢測蛋白藥物的sandwich format的LBA,而蛋白藥物在大多數情況下,意味著單克隆抗體。雖然相關技術有多方面的進步,本文將重點關注已經商業化和在生物分析行業十分流行的技術。文末的參考可以引導讀者非常詳細地了解相關內容。 目前最流行的3種技術是ELISA、電化學發光(ECL、MSD、NJ、USA)和Gyrolab&reg;(Gyros Protein Technologies、Uppsala、Sweden)。 同時,本文會簡要地涵蓋以下幾項不經常使用但具有超高靈敏度的技術:如基于Single Molecule Array平臺(單分子陣列,Simoa&trade;),單分子計數[SMC&trade;]的Erenna&reg; 平臺(Singulex Inc、CA、USA),免疫聚合酶鏈反應平臺(immuno-polymerase chain reaction、immuno-PCR、 Imperacer&reg;、Chimera Biotec GmbH、Dortmund、Germany)。另外,還會簡要介紹multiplexing的Luminex平臺(Luminex xMAPR、Luminex Corporation、TX、USA)。在藥物發現階段,分析方法開發是生物分析的主要內容之一,同時,應當特別考慮評估耐受性(tolerance)和分子完整性(molecular integrity)。2.臨床前LBA方法的關鍵參數 用于藥物發現階段的生物分析方法有5個重要參數:樣品體積要求,定量的動態范圍,測試運行時間,靈敏度和自動化程度。本文將簡要地評估這些參數,并介紹這些參數在選擇檢測平臺時發揮的重要作用。 1) 樣本體積消耗 從小鼠身上單次采集的血清或血漿樣本的體積約為50ml。隨著在動物研究中嘗試實施3R(替換replacement,減少reduction 和細化refinement ),生物分析業界正在探索多種微體積采樣方法,而這將進一步大幅度地減少樣本體積。另外,在分析小鼠腦脊液等基質的樣本時,只有2-5ml的體積可用??紤]到有可能意外損失樣本,故從動物獲得的樣本體積應足以分析樣本至少兩次。因此,應當首選能夠使用低樣本體積的分析技術和平臺。 2) 定量動態范圍 能夠在寬廣的動態范圍內,至少包含3-4個數量級,進行定量分析是極其有益的。對于PK分析,這允許較高的最小稀釋要求(minimum required dilution,MRD),以盡量減少樣本基質效應,同時為低劑量給藥的樣本提供所需的定量靈敏度。同樣,對于PD,它允許在更寬廣的范圍內測試平行性(parallelism),從而允許對含有高濃度生物標志物的樣品進行大幅度的稀釋。對于生物標志物測量,稀釋還有助于最大限度地減少樣本和基于緩沖液的標準曲線(替代基質)之間的基質差異,從而更精確地生成定量數據。 3) 分析運行時間 分析運行時間是實施PK/PD樣本分析所需時間,假定使用之前已為該應用開發分析方法,這也意味著假定試劑已標記,緩沖液已制備,并且相關儀器也已準備就緒。在non-GLP臨床前生物分析實驗室中,時間是至關重要的;在大多數情況下,最終目標是提供可靠,且可以重現的數據,同時保持較短的分析運行時間。這就提高了實驗室的效率,并允許該部門同時支持多個項目。分析96樣本微孔板的運行時間可以在1-5小時的范圍之間,具體取決于采用的分析技術(對于某些分析技術,有額外的隔夜捕獲步驟overnight capture step)。 4) 靈敏度 大多數傳統的單克隆抗體的PK定量LLOQ在幾個ng/ml范圍。一些高效力藥物分子(需要低劑量)和低豐度(或下調了的)的生物標志物可能需要更高的靈敏度。應當依據個案的情況為這些應用選擇相應的分析平臺。此外,高靈敏度的分析方法是高度依賴所使用的試劑,因此獲得高特異性和高親和力的試劑可以大大提高定量的靈敏度。提升分析靈敏度也同時降低了對樣本體積的要求,見1)。 5) 自動化 自動化平臺可縮短分析人員操作的時間,提高生物分析部門的效率。在臨床前藥物開發的環境中,分析平臺的完全自動化,在需要開發分析方法且進行常規樣本分析的情況下是非常有益的。同時,對于方法開發,優化和因基質或物種變化而進行的方法認證,需要能夠修改自動化平臺上的檢測方法的靈活性。 除了分析測試自動化之外,還可以自動化地制備標準品(standards)和質量控制樣品(QCs),從而節省時間,降低珍貴參照(比)物料(reference material)的使用和成本,并減少手動移液產生的誤差。一些分析測試平臺,如Gyrolab,允許檢測的全自動化,而Hamilton和HPD300這樣的平臺,則可以允許自動化移液體,或制備標準品和QCs。超高靈敏度的Simoa&trade;平臺也支持自動化地樣本檢測。3.臨床前LBA免疫測試平臺 目前,有多種LBA測試平臺在新藥開發中得到應用。表1列出了若干LBA測試平臺及其比較。本文將進一步介紹其中幾種在生物分析行業中應用比較廣泛的平臺。由于為臨床前研究開發分析方法所選擇的LBA平臺,很可能會繼續在臨床研究中繼續使用,因此,選擇合適的測試平臺,將會是影響深遠的一個重大決定。表1. 若干LBA測試平臺相關特征的比較備注:上表中的方法未全部在文中詳細介紹。 近年來,一系列immunoassay的新技術,特別是基于微(磁)珠(beads,magnetic,etc.)的技術,從測試格式的物理學/物理化學層次,待測物的捕獲,檢測信號的收集/放大,數據處理等方面,實現了顯著改善,并取得了相當的商業性成功,雖然這些新方法在化學和生物學層次,仍然是基于抗體-抗原的結合作用以及基本的夾心式immunoassay。本文選擇若干得到廣泛商業應用的測試平臺,及其在臨床前生物分析方法開發的應用作初步介紹,希望起到拋磚引玉的目的,引發更多關于新的分析測試技術的開發和應用的相關討論、交流和研究。ELISA平臺 ELISA是生物制藥行業內外使用最廣泛的配體結合式(LBA)檢測平臺。ELISA的測試格式包括直接式、間接式和夾心式;ELISA經常用作與開發中的新分析平臺進行比較的基礎;在96孔板上,通常對樣本進行復孔(duplicate)測定,手動或半自動運行。通常使用比色法的檢測試劑,但有時也使用其他檢測試劑,如發光(luminescence)和熒光(fluorescence)。通常,對ELISA方法,需要監測試劑,如抗體(antibodies)、配體(ligands)、緩沖液(buffers)以及批次的變化。 幾十年來,傳統的ELISA一直是蛋白質定量分析最常用的技術,因此也是最可靠的技術之一。即使在今天,大多數生物標志物的商業檢測試劑盒都是基于ELISA的。多數新分析技術都與作為金標準的ELISA比較。但是,這種分析技術也有缺點,例如,測試運行時間約長為 4-5 小時,樣品體積消耗大(測定體積為100 ml),靈敏度低與LLOQ在大多數情況下接近低-中ng/ml,以及狹窄定量動態范圍(2-3 數量級)。這項技術對于某些臨床前生物分析的應用仍然很有吸引力,比如血清單克隆抗體的PK。該平臺還提供了在方法開發早期階段評估測試方法不同部分的靈活性。表2列出了不同檢測平臺的性能,以一個mAb藥物為例。表2. 與ELISA比色法檢測相比較,一個mAb在若干檢測平臺上LBA方法參數的比較備注:上表中的方法未全部在文中詳細介紹。電化學發光(Electrochemiluminescence,MSD)平臺MSD平臺是一種基于微孔板的測試格式,它利用電化學發光(ECL)信號進行檢測。在這個平臺上,免疫測試格式類似于用于藥物定量和target sample measurements的典型ELISA格式,但預計靈敏度會因使用化學發光而增加。MSD平臺似乎主要在檢測信號的產生和收集上,相對于ELISA有顯著改善:MSD采用SULFO-TAG(三聯吡啶釕)是一種發光底物,其分子量約為1000Da(大約是HRP的1/40),因此空間位阻小,易于標記抗體,且不易妨礙其與待測物或其它抗體的結合。SULFO-TAG在陽極表面失去電子,發生氧化,在三丙胺陽離子自由基的催化及三角形脈沖電壓激發下,可產生高效、穩定、連續的電化學發光信號,使得檢測信號增強并穩定(見圖1)。圖1. MSD的電化學發光產生的檢測信號 MSD的電化學發光技術在生物分析行業廣受歡迎。它保持了ELISA格式的優點,如方法開發的靈活性,另外在其它領域也非常出色,如較小的樣品體積要求(測定體積為25&ndash;30 ml),更高的靈敏度(低-中pg/ml)和寬泛的動態范圍(4-5個數量級)。當以均相的測試格式運行時,此平臺可能受到鉤效應(hook effect)的影響。鉤效應起源于不合適的抗體-抗原濃度比例,但是可以減輕甚至消除的。此外,試劑和微孔板容易有批次間的變化,因此,強烈建議在批次之間進行交叉比較。 MSD微孔板的孔底為石墨底,捕獲抗體包被載量可提升10-50倍,檢測范圍比ELISA擴展了10-100倍,定量動態范圍高達5-6個數量級,靈敏度可提升10-1000倍(fg/ml-pg/ml級別)。根據對血清免疫學中的&ldquo;帶現象&rdquo;的理解,可推測:包被抗體載量可以根據檢測靈敏度的需要進行調整,以避免鉤效應(hook effect)。分析運行時間接近約3-4小時,但考慮到該平臺提供的其它優勢,測試時間可被視為一個合理的折中。該平臺允許同時運行多個96孔板,因此在分析數百個樣品時,測試一個或多個96孔板也只需要基本相同的時間,這一點可能非常有利。此平臺不是自動化的,因為它需要分析人員參與每個步驟。此外,該平臺還提供與實驗室信息管理系統(LIMS)的集成和US FDA 21 CFR part 11的合規性,允許分析方法結果容易地轉移到GLP的環境中。Gyrolab平臺 Gyrolab是一個非96微孔板的免疫測試平臺,具有液體處理功能(liquid handling capability),使用小體積的樣本和試劑在光盤(CD)上實施免疫測定。該測試格式使用biotinylated捕獲試劑和標記有fluorophore的檢測試劑,在納升體積的使用親和力微珠填料的捕獲柱(nanoliter volume affinity capture column)上進行測試。利用CD的微觀結構確定樣品和試劑的體積,并通過旋轉CD將樣本加到捕獲柱上。在每個CD上,有96(在1000nlCD上)-112(在20或200nl CD上)個微觀結構,可產生96-112個數據點(1小時/CD運行時間)。在Gyrolab工作站上,樣品處理完全自動化,液體處理臂將樣品和試劑從微孔板轉移到CD,并通過激光/檢測器測定每個捕獲柱的熒光信號?;A的Gyrolab xPlore&trade; 允許無人值守地一次分析1張CD,而Gyrolab xPand&trade;允許分析多達5張CD(即480-560個數據點)。在大多數情況下,動態范圍為3-4個數量級。該平臺的靈敏度可與MSD的ECL平臺(低-中pg/ml)相媲美。 Gyrolab是一個自動化的微流體系統(microfluidic system),且其離心操作能夠高效地處理微量體積,因此大多數重復(duplicate)分析只需要小于5ml的樣本體積,就可以從同一微孔板重新分析未使用的樣品。該平臺使用包被了捕獲抗體的微珠來捕獲待測物,與下面討論的Luminex和Simoa平臺在捕獲待測物的原理上,即在更大的固相表面積上有更多的捕獲抗體(與ELISA相比),似乎有異曲同工之妙,總體效果是提升了捕獲待測物的效率,提升了靈敏度。Gyrolab的一個出色特點是,可以選擇不同的CD來調整定量的動態范圍,以滿足對低或高濃度樣本的分析。該分析技術平臺對于大分子的常規臨床前PK/PD分析無疑是非常有效的。此平臺在縮短檢測時間方面非常有效,無需人工移液和參與分析的每一步驟。這使得該平臺對開發方法和分析樣本都極具吸引力。此外,該平臺還提供實驗室信息管理系統集成和FDA 21 CFR part 11合規性,能夠將分析方法輕松地轉移到GLP環境中去。 Gyros的一個可能缺點是,如果以基于微孔板格式開發了分析方法檢測,則相同的試劑在轉移到Gyros時可能會性能欠佳,并且可能需要顯著地優化才能獲得最佳性能。這是因為Gyros的孵育時間極短,需要高結合效率的捕獲試劑,而基于微孔板的檢測則不需要這種試劑,因為較長的孵育時間抵消了該需求。因此,如果使用Gyros,則需要在同一平臺對試劑進行篩選,然后測試其分析性能,并開發完整的分析方法。BIAcore平臺 基于BIAcore平臺的藥物分析,依賴于待測物與固定在傳感器芯片(sensor chip surface)表面的待測物特異的試劑的相互作用。BIAcore實時監測該結合相互作用,并讀出以相對響應單元(relative response units,RU)為單位的響應,該響應與Surface Plasmon Resonance(SPR)角度的變化相關,并且由傳感器芯片表面的液體薄膜的折射率變化所決定。折射率的變化與芯片表面結合的質量成正比。這種實時的無標記技術與典型的免疫測定法有很大的不同,免疫測定法需要多個孵育和洗滌步驟,以及用于信號讀出的標記檢測抗體(labeled detection antibody)。對于臨床前藥物分析,可以將抗藥物特異性抗體固定在芯片表面實施通用化檢測,當樣本流經分析隔室(cell)時,該抗體將結合樣本中所含有的mAb藥物。其它方式,如在芯片上固定待測物,也可用于特定的定量分析。對于此平臺,在驗證期間必須經過10個周期的殘留(carry-over)測試,并且還應確定最大信號值(相對于背景值)的信號噪聲比(signal-to-noise ratio),以評估樣本分析期間的方法運行性能。此外,還必須評估在執行大批量樣本分析的較長時期內的芯片穩定性(分析方法是特定于所使用的芯片類型)。由于該平臺通常運行一夜或更長時間,故樣本和試劑的穩定性必須比典型的免疫測試方法具有更長的短期穩定性(超過24小時),而且在Biacore T200上,樣本的總通量(overall sample throughput)較低。此外,單個分析運行需要包含校準曲線后和運行序列中間隔的QC樣本。通常,這對應于一個微孔板的校準品(calibration standards,Cs)和樣本。 可以對BIAcore實施IQ/OQ/PQ驗證,以滿足符合21 CFR Part 11的要求。使BIAcore儀器達到GLP合規的狀態不是一個簡單的過程,需要投入大量時間來處理數據傳輸(data transfer)和合適的校準(隨時間推移的)等問題。 該測試平臺更多地用于LBA關鍵試劑的篩選和表征。LBA關鍵試劑一般定義為:對待測物(analyte)特異性的LBA分析試劑,如抗體、多肽、蛋白質、耦合物(標記),作為試劑的藥物和ADA試劑(陽性和陰性對照品)。多通道(multiplexing)分析技術 Multiplexing測試方法可以節省時間和寶貴的樣品。但是,存在一個局限:即它們經過嚴格優化,只能在指定范圍和基質中使用。不同的待測物對不同的基質和稀釋的反應不同,因此,對于某個待測物,優化參數的偏差可能需要重新優化整個multiplexing檢測方法。在臨床前生物分析中,需要探索了解多種藥物、多個藥物變異體、多種藥物的組合和多種生物標志物。因此,檢測的靈活性是非常關鍵的,對此multiplexing可能幫助意義不是很大。 在樣本體積十分有限的特殊情況下,可以探索multiplexing。允許自主開發multiplexing方法的平臺包括:Luminex的xMAP技術,使用獨特的dyed beads,并取決于所使用的儀器(MAGPIX、LUMINEX 200或FLEXMAP 3D),可以分析50-500待測物;Quanterix SR-X,使用6個獨特的磁珠,可以multiplexing多達6個待測物;Quanterix SP-X可以multiplexing到10個待測物,使用其基于平面陣列的空間分離的化學發光成像技術。其中,MSD允許從黃金標準的singleplex平臺直接轉換到U-PLEX平臺進行檢測;Quanterix的SR-X和SP-X平臺在multiplexing時能夠提供超高靈敏度。Luminex平臺 常用的Luminex&reg;100/200&trade;系統是基于流式細胞學(flow cytometry)原理的靈活程度很高的分析儀。該系統使用很小的樣本體積,在單個微孔板的孔/井中multiplex(同時測定)多達100個待測物。該平臺可以操作許多檢測格式,包括核酸測試方法(nucleic acid assays)、受體-配體測試方法(receptor-ligand assays)、免疫測試方法(immunoassays)和酶測試方法(enzymatic assays),并提供快速且經濟高效的生物測試結果。 該系統是xMAP&reg; 3個核心檢測技術的組合。第1個是xMAP微球,這是一個熒光染色,微米大小的聚苯乙烯微球系列,既作為標識符,又充當建立測試方法的固體表面。第2個是基于流式細胞學的儀器(flow cytometry-based instrument),Luminex 100/200分析儀集成了關鍵的xMAP檢測組件,如激光、光學器件、流體技術和高速數字信號處理器。第3個組件是xPONENT&reg;軟件,它專門設計為基于方案(protocol-based)的數據采集方式,具有強大的數據回歸分析的能力。 Luminex利用特定染料的珠子(beads),該珠子包被有特定的抗待測物抗體。添加待測物孵育后,再添加熒光標記的抗體,以檢測和定量待測物。此項技術使用供應商預先生產的試劑盒,主要用于PD檢測,即生物標志物的定量分析,并且采用多通路檢測(multiplexing)的方式。商業化的試劑盒數量巨大,據稱達1,300余種。一個樣本可以用于測定多個待測物,據稱最多可達500個,并且可以對每種待測物設置接受標準。不足之處是:不同待測物珠子(analyte beads)有交互干擾(cross-talk)的傾向,而且測試方法對光敏感,因此必須采取特殊的預防措施。超高靈敏的定量分析技術 對于某些藥物和樣本基質,可能需要具有fg/ml-低pg/ml的超高靈敏度的定量分析方法。相關狀況包括定量低豐度的生物標志物,對強效藥物分子的PK分析和定量極易受到基質效應影響的待測物,顯然,大幅度稀釋樣本會提升對測定平臺靈敏度和定量動態范圍的要求。 目前,允許自主開發方法的超高靈敏度的定量分析平臺包括來自Quanterix,基于Simoa&trade;的數字化ELISA,來自Singulex的使用單分子計數(single molecule counting)的Erenna&trade;,以及來自Chimera Biotec GmbH的基于免疫PCR(immuno-PCR)的Imperacer。 之前已經發表的文章詳細評估了這3種超高靈敏度的分析技術,以及其它不太流行的分析技術。這3種技術都是需要供應商提供檢測方法的分析儀器,但都允許用戶自主開發檢測方法。當擁有實時定量PCR(qPCR)儀器(thermal cycler fitted with a fluorimeter)時,還可以獨立于供應商提供的試劑或儀器開發Immuno-PCR方法。在使用這些技術時,需要特別注意一些非常規情況,包括Simoa&trade; 的磁珠偶合,DNA與檢測試劑的偶合,以及無污染地操作immuno-PCR?;趩畏肿雨嚵校⊿imoa&trade;)的數字化ELISA 來自Quanterix公司的Simoa&trade;數字化ELISA是一個很有前途的平臺,它可以使蛋白質定量達到fg/ml。該技術采用基于微觀順磁珠(microscopic paramagnetic bead)的免疫測試方法,并結合獨特的信號檢測和數據采集系統。數字化ELISA分2個階段實施。在捕獲抗原的第1階段,涂有捕獲試劑的微觀磁珠與樣品混合,然后加入生物素標記的檢測抗體(biotinlabeled detection antibody)和鏈球菌素-&beta;-半乳糖酶(streptavidin&ndash;b-galactosidase)。然后,這些珠子被加載到光盤上,光盤上裝有一系列體積為飛升(femtoliter)大小的微井陣列。每個微井的直徑為4.5mm,能夠容納直徑為2.7mm的珠子數目只能為1或者為0。被硅膠墊片密封的微井含有熒光底物,其用于信號生成和放大(圖2)。Simoa&trade; 技術在定量分析的第二階段采用了獨特的信號檢測系統。微井(50飛升)中濃度相對較高的發出熒光的產物(陽性事件)和白光散射(white light scattering)測定的總珠子負載可以由標準的CCD攝像機輕松地檢測到和記錄。通過改進幾個檢測步驟,Simoa&trade; 實現了超高靈敏度。圖2. 在飛升體積(femtoliter)的井陣列中裝載,密封和成像單個順磁珠 因為在100mL的反應體積中有約200,000個磁珠,而每個磁珠捕獲約80,000個抗體分子,抗體-待測蛋白的比值和平衡允許高效地在給定的示例中,>70%捕獲待測物。由于溶液中有這么多的磁珠,而且可以在溶液中運動,所以捕獲效率進一步提高,因為每個目標蛋白在不到1分鐘時間內就會遇到磁珠。這與傳統的LBA方法中,固定在一個表面的捕獲抗體與待測物的緩慢結合完全相反。另外,優化了的biotin-labeled detection antibody與streptavidin&ndash;b-galactosidase之間的比值,可減少檢測背景并最大化特定信號的采集。與Simoa&trade;檢測系統相結合,相關熒光信號可以通過熒光底物(fluorogenic substrate)的酶消化(enzymatic digestion),而進一步放大。 Simoa&trade; 檢測系統能夠檢測到單個結合事件(a single binding event),該事件可以在低濃度下以數字方式獲得(靈敏度增高,數字化ELISA),或在高濃度模式下以模擬的方式獲得(擴展了的定量動態范圍)。熒光用于檢測酶活性,并能夠測定每個磁珠上酶的平均值。與下面描述的Erenna&reg;平臺一樣,結合數字式和模擬式的讀數功能,可以實現非常寬廣的定量動態范圍。由于最終信號采集是在平面陣列上完成標準成像,因此與使用 Erenna&reg;等流體系統的數值讀出相比,數據采集更快。 盡管Erenna&reg; 和Simoa&trade; 平臺具有數字讀出和寬廣的定量動態范圍等共同點,但Simoa&trade; 平臺是一個完全自動化的系統,該儀器可以實施樣品稀釋(高達1:10稀釋),混合,洗滌,孵化和數據采集步驟。Simoa&trade; 能夠同時測定多達10種不同的待測物(multiplexing)。這是通過對單個捕獲抗體使用不同的dye linkers來實現的。之后,對陣列進行多個波長的熒光成像,以識別擁有不同dye linkers的亞組,并確定是否存在enzyme reporter標記。與Singulex和Quanterix一樣,有許多試劑盒可供選擇。也可以&ldquo;定制&rdquo;開發,或&ldquo;自主開發&rdquo;分析方法。 憑借較高的靈敏度、multiplexing和自動化功能,該平臺看起來非常理想。Simoa&trade;平臺與LIMS系統兼容,其軟件滿足監管級別的生物分析據FDA 21 CFR part 11的合規性要求。筆者認為該平臺因其超高靈敏度(可以使用微量樣本體積)和自動化操作,在相當的程度上可以替代Gyrolab平臺,用于臨床前PK樣本分析。Singulex Erenna&reg;平臺 Erenna&reg;免疫測試系統利用兩步的過程實現超高靈敏度定量分析(ultrasensitive assays)。最初,使用biotinylated capture試劑和熒光標記檢測試劑,在96孔板中實施基于珠子(beads)的夾心式測試格式。從珠子上洗脫的被捕獲待測物被轉移到一個384孔的讀取板(reading plate),然后將該讀取板放置到檢測儀器上。然后樣本一個接一個地通過毛細管進入flow cell,并在其中實施激光誘導的單分子檢測分析。該平臺的優勢是寬廣的定量動態范圍,其通過獨特的軟件曲線擬合算法實現。該算法利用了多次讀數,提升了靈敏度。 與其它測試平臺相比,檢測時間較長,但一些線下的自動化設備可用于洗滌和轉移步驟。該平臺通常用于PD檢測,但也可用于PK定量分析。對供應商生產和供應的試劑盒,其穩定性必須由最終用戶評估,因為試劑的穩定性通常是未知的。此外,可以購買通用試劑,以開發內部的檢測試劑,而且,基于微孔板的格式也能兼容使用96或384孔板的平臺。供應商建議對校準品(Cs)進行3次復測(triplicate),以便在低濃度下進行精確分析??梢酝ㄟ^IQ/OQ程序,與內部PQ相結合,驗證Erenna&reg;平臺。如果將Erenna&reg;與LIMS結合,以實施監管級生物分析,則一個選擇是使用讀出的三個信號之一進行濃度分析。但是,動態范圍和靈敏度可能會受到影響,具體取決于選擇哪個讀出的信號。Immuno-PCR (Polymerase Chain Reaction) Immuno-PCR(Chimera)是一種擴增免疫測試技術(signal amplification immunoassay)。它涉及DNA標記的檢測抗體的擴增,從而提高靈敏度。與ELISA中使用的抗體-酶偶合物(antibody&ndash;enzyme conjugates)不同,IPCR中的關鍵試劑是抗體-DNA偶合物(antibody&ndash;DNA conjugates),其中一個DNA標記(marker)與檢測抗體相偶合。然后,將DNA polymerase加入到反應主混合物之中,就可以放大檢測信號,并通過定量PCR(qPCR)而定量測定DNA-marker的濃度,從而定量分析analyte&ndash;antibody immunocomplex。因此,該技術主要改進了檢測信號的放大方法。但是,如果檢測抗體與血清或血漿中的成分發生交叉反應,該平臺可能容易受到強大基質效應的影響。因此,在方法驗證期間必須評估信噪比,并用于確定樣本分析期間方法的性能。 該平臺的優點包括寬廣的定量動態范圍和提升了的靈敏度,這對PD分析是很有益的。與 Erenna&reg;平臺一樣,檢測試劑高度依賴于供應商,對于大批量樣本分析來說,成本可能很高。如同MSD、Erenna&reg;和其它基于珠子的平臺一樣,應特別注意標記試劑和微孔板批次的變化。由于該平臺依賴于PCR技術,因此在處理樣本、試劑和移液器槍頭時必須小心謹慎,以避免污染。此外,數據分析可能也會較為麻煩(cumbersome)。7. 特別聲明 本文如有疏漏和誤讀相關指南和數據的地方,請讀者評論和指正。所有引用的原始信息和資料均來自已經發表學術期刊, 官方網絡報道等公開渠道, 不涉及任何保密信息。 參考文獻的選擇考慮到多樣化但也不可能完備。歡迎讀者提供有價值的文獻及其評估。參 考 文 獻 1. 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  • 最新消息!國家藥監局發布《藥品上市后變更管理辦法(試行)》
    2021/01/13
    今天(1月13日)下午,國家藥監局官網發布了《藥品上市后變更管理辦法(試行)》的公告?!端幤飞鲜泻笞兏芾磙k法(試行)》共涵蓋總則,變更情形,變更管理類別確認及調整,變更程序、要求和監督管理,附則5大章節35項條款。值得一提的是,為配合《藥品上市后變更管理辦法(試行)》的實施,公告中還專門發布了《關于實施<藥品上市后變更管理辦法(試行)>的說明》《<藥品上市后變更管理辦法(試行)>政策解讀》《藥品上市許可持有人變更申報資料要求》三個附件文件?!端幤飞鲜泻笞兏芾磙k法(試行)》予發布之日起正式實施。為貫徹《藥品管理法》有關規定,進一步加強藥品上市后變更管理,國家藥監局組織制定了《藥品上市后變更管理辦法(試行)》,現予發布,自發布之日起施行,此前規定與本公告不一致的,以本公告為準。各省級藥品監管部門應當落實轄區內藥品上市后變更監管責任,細化工作要求,制定工作文件,明確工作時限,藥品注冊管理和生產監管應當加強配合,互為支撐,確保藥品上市后變更監管工作平穩有序開展。特此公告。附件:1.藥品上市后變更管理辦法(試行)2. 關于實施《藥品上市后變更管理辦法(試行)》的說明3. 《藥品上市后變更管理辦法(試行)》政策解讀4. 藥品上市許可持有人變更申報資料要求   國家藥監局   2021年1月13日
  • CDE官網發布《晚期肝細胞癌臨床試驗終點技術指導原則》
    2020/12/23
    11月30日,CDE官網發布了《晚期肝細胞癌臨床試驗終點技術指導原則》。該文件包含了晚期肝細胞癌常用終點指標、探索性試驗設計及終點考慮、關鍵注冊試驗設計及終點考慮等5大章節,于11月30日正式實施。
博濟醫藥
Boji pharmaceutical
  • 成立時間
    創建于2002年
  • 所屬行業
    合同研究組織
  • 市場地位
    國內CRO龍頭企業;國際知名企業。
  • 員工數量
    近700多名醫藥研究人才
  • 發展歷程

    經過十八年的發展,博濟已發展成為能提供一站式全流程服務的CRO,在技術實力、服務質量等多方面處于行業領先位置,成為我國本土CRO公司的龍頭企業。

  • 企業文化
    戰略目標: 鞏固國內領先 實現國際領先 打造百年品牌。經營理念: 替客戶著想 為客戶服務 與客戶共進步 致力于提供新藥臨床前研究。
合作理念

我公司一直秉承“專業、誠信、進取、和諧”的理念,在新藥臨床研究領域經過近十年的風雨征程,實現了飛速的發展和跨越,取得了令人矚目的成績。

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